蝙蝠多栖息于岩穴溶洞、岩石缝隙、房檐瓦缝、树洞或树冠下。昼伏夜出。70%的蝙蝠种类主要以昆虫和其他小节肢动物为食；其余的种类主要以果实、花蜜和花粉为食。一些热带种类蝙蝠是食肉的，有3个种类的吸血蝙蝠以血液为食。
蝙蝠主要在夜间活动，大多数蝙蝠依靠特有的回声定位能力判定外界物体及自身的位置。蝙蝠由口腔或鼻部发出的高频短波可达20~210千赫兹，被外界物体反射回来的声波可由耳朵接收。
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