猫头鹰是典型的肉食性鸟类，其食谱以小型哺乳动物和昆虫为主。作为夜行性猛禽，猫头鹰的主要猎物包括田鼠、家鼠等啮齿动物，这类食物不仅易于捕捉，且能提供高蛋白以满足其能量需求。

此外，猫头鹰也会捕食昆虫（如蝗虫、甲虫）、蚯蚓、蛙类、蜥蜴、小型鸟类（如麻雀、鸽子）甚至蛇类。不同种类的猫头鹰因体型和栖息地差异，食物偏好有所不同：例如，雪鸮在食物匮乏时会转而捕食雪兔、野鸡等；而林斑小鸮则以蜥蜴和小型啮齿动物为主食。部分猫头鹰还会捕食鱼类或腐肉。总体而言，猫头鹰的食性广泛，但均以动物性蛋白为核心。