猫头鹰主要以夜行性为主，在白天通常较为安静，但并非完全不叫。一些猫头鹰种类在白天也会发出叫声，比如斑头鸺鹠，虽然它以夜行性为主，但有时也会在白天活动，其叫声主要在夜间和清晨响起，不过白天也有可能发出声音。

猫头鹰的叫声具有多种作用，一方面用于交流，如求偶、标记领地等；另一方面，不同种类的猫头鹰叫声特点各异，有的叫声独特，有的则较为低沉。例如，在一些文化中，猫头鹰的叫声被赋予了特殊的象征意义，可能被视为不祥之兆，但从科学角度来看，这只是猫头鹰正常的生理行为表现。它们的叫声与其生活习性和生态环境密切相关，是其在长期进化过程中形成的一种适应方式。